蛋白質(zhì)含量測(cè)定法,是生物化學(xué)研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四種古老的經(jīng)典方法,即定氮法,雙縮尿法(Biuret法)、Folin-酚試劑法(Lowry法)和紫外吸收法。另外還有一種近十年才普遍使用起來(lái)的新的測(cè)定法,即考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法靈敏度最高,比紫外吸收法靈敏10~20倍,比Biuret法靈敏100倍以上。定氮法雖然比較復(fù)雜,但較準(zhǔn)確,往往以定氮法測(cè)定的蛋白質(zhì)作為其他方法的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)。也可以通過使用定氮儀進(jìn)行快速的測(cè)定分析。
值得注意的是,這后四種方法并不能在任何條件下適用于任何形式的蛋白質(zhì),因?yàn)橐环N蛋白質(zhì)溶液用這四種方法測(cè)定,有可能得出四種不同的結(jié)果。每種測(cè)定法都不是完美無(wú)缺的,都有其優(yōu)缺點(diǎn)。在選擇方法時(shí)應(yīng)考慮:①實(shí)驗(yàn)對(duì)測(cè)定所要求的靈敏度和精確度;②蛋白質(zhì)的性質(zhì);③溶液中存在的干擾物質(zhì);④測(cè)定所要花費(fèi)的時(shí)間
凱氏定氮儀法的原理以及優(yōu)缺點(diǎn)是:樣品與濃硫酸共熱。含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)生氨(消化),氨又與硫酸作用,變成硫酸氨。經(jīng)強(qiáng)堿堿化使之分解放出氨,借蒸汽將氨蒸至酸液中,根據(jù)此酸液被中和的程度可計(jì)算得樣品之氮含量;用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測(cè)定;干擾少;費(fèi)時(shí)太長(zhǎng)
定氮儀:http://www.dsddy.cn/
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